Altın bileti buldunuz mu? HIV-1 gecikmesinin yeniden aktivasyonu için siklin T1 gereklidir
Kombinasyon antiretroviral tedavinin (ART) keşfinden 20 yıldan fazla süre geçmesine rağmen HIV enfeksiyonunun tamamen ortadan kaldırılması henüz sağlanamamıştır. Antiretroviral tedavi viral replikasyonu kontrol etse de tedavi edici değildir. Bunun nedeni, virüsün uzun ömürlü konakçı hücrelerin (“hafıza” CD4 T hücreleri gibi) genomlarında aktif olmayan bir durumda gizlendiği HIV gecikmesinden kaynaklanmaktadır. Bu, virüsün bağışıklık gözetiminden kaçmasına izin verir. ART, viral replikasyon mekanizması üzerinde etkili olduğundan, aktif olarak çoğalmayan latent HIV, ART’tan kaçabilir. Bu nedenle, HIV’i iyileştirmek ya gizli rezervuarı ortadan kaldırmayı ya da rezervuardaki virüsü kalıcı olarak susturmayı (ya da her ikisinin bir kombinasyonunu) gerektirir.
yayınlanan yeni bir çalışmada, HIV gecikmesinin ortaya çıkması için konakçı genlerin neye ihtiyaç duyduğuna dair anlayışımızı geliştirmek amacıyla, Virüslerİnsan Biyolojisi ve Temel Bilimler Bölümlerindeki Imerman laboratuvarından araştırmacılar, Cyclin T1 konakçı faktörünün, onu aktive edebilecek çok çeşitli koşullar altında HIV reaktivasyonunu teşvik etmek için gerekli olduğunu bildirmektedir.
Çalışmanın baş yazarı ve Imerman laboratuvarında yüksek lisans öğrencisi olan Terry Haver, HIV’in küçük molekül gecikme reaktivatörlerinin (LRA’lar) varlığında gecikmeden ortaya çıkması için gereken konakçı faktörlerini tanımlamak için bir HIV-CRISPR taraması gerçekleştirdi. Cyclin T1 (CCNT1) beyazperdedeki en başarılı filmdi. Siklin T1 ve Sikline bağımlı kinaz 9’un (CDK9), HIV transkripsiyon uzamasını teşvik etmek için pozitif transkripsiyon uzatma faktörü b (P-TEFb) ile bir kompleks oluşturduğu daha önce gösterilmişti. Haver, “Siklin T1 ve onun viral transkripsiyon uzamasındaki rolü yeni değil” dedi. “Fakat bizim için çarpıcı olan şey, Cyclin T1’in, P-TEFb kompleksinin bir parçası olarak transkripsiyon uzamasındaki rolü nedeniyle her zaman temel bir gen olarak anılmasıydı” diye ekledi. Haver, Siklin T1’in durdurulmasının, siklin T1 kaybının “HIV geninin transkripsiyonunu diğer herhangi bir konakçı genden çok daha fazla etkilediğini” gösterdiğini ancak “Siklin T1’in durdurulmasının konakçı hücre fonksiyonu üzerinde gözle görülür bir etkisi olmadığını” açıkladı.
HIV bağımlılık faktörü (HIV-Dep) gen kütüphanesi kullanılarak enfekte Jurkat T hücreleri (J-Lats 10.6 ve 5A8) üzerinde bir HIV-CRISPR gecikme taraması gerçekleştirildi. Sorun şu: Kılavuz RNA, LRA tedavisinden sonra enfekte olmuş hücrelerin yeni üretilen virüslerine dahil edilecek şekilde değiştirildi. Bunun arkasındaki fikir, bir hücrenin gecikme için gerekli genden yoksun olması durumunda HIV’in tekrar aktif hale gelememesiydi. Böylece, spesifik kılavuz RNA (yeniden aktivasyon için gerekli olan bir geni hedef alan) yeni oluşan viryonlarda bir araya getirilmeyecektir. Ekip, derin sıralama gerçekleştirerek, salınan virüs havuzunda yeterince temsil edilmeyen kılavuz RNA dizilerini tanımlamayı başardı. Ekranda görülen en iyi sonuçlardan biri Cyclin T1 (CCNT1) oldu. Taramayı doğrulamak için ekip, J-Lats hücrelerindeki CCNT1’i devre dışı bıraktı ve ardından birkaç LRA ile tedavi uyguladı. Tüm tedavilerde, vahşi tip (WT) CCNT1 hücreleri HIV’i yeniden aktive edebildi, ancak CCNT1 KO hücreleri, LRA’ların varlığında HIV’i yeniden aktive etmekte başarısız oldu, bu da Cyclin T1’in HIV reaktivasyonu için gerekli olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, CCNT1 kaybı, p-TEFb kompleksinin bir parçası olarak CDK9’a da bağlanan bir CCNT1 homologu olan CCNT2’nin ifadesini etkilememiştir; bu, CCNT1’in benzersiz bir rol oynadığını düşündürmektedir. Ayrıca CCNT1 KO, J-Lat modelinde hücre çoğalmasını etkilemedi. Sonuçlar birincil CD4 T hücrelerinde (enfekte bireylerde HIV’in ana hedefi) doğrulandı ve CCTN1 kaybı, birincil CD4 T hücrelerinin aktivasyonunu etkilemedi.
